本发明提供了一种抗结核杆菌的重组卡介苗，它是将含有编码HspX蛋白基因的重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒转化入卡介苗中形成的重组卡介苗rBCG::X。该重组卡介苗rBCG::X实现了HspX蛋白的过表达，免疫动物后，可显著地诱导机体产生针对HspX蛋白的细胞免疫反应，并产生稳定和持久的抗感染保护，克服了现有卡介苗保护期短和对成人结核病保护效果不稳定等不足。

本发明涉及一种分泌人干扰素α－2b的重组卡介苗rBCG－IFNα－2b及其构建方法、鉴定方法，利用基因工程技术将起分泌作用的卡介苗Ag85B信号肽片段和人IFNα－2b的基因克隆至pMV261，得到卡介苗穿梭表达载体pMV261－Ag85B－IFNα－2b，然后采用电转化技术将该载体导入BCG中，构建重组卡介苗rBCG－IFNα－2b，依靠pMV261－Ag85B－IFNα－2b在BCG的复制和信号肽的分泌作用，能够高效分泌人IFNα－2b。本发明得到的重组卡介苗rBCG－IFNα－2b既保留了原有BCG的免疫原性，又能持续分泌细胞因子IFNα－2b，从而提高BCG的免疫活性；IFNα－2b能够直接作用于肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞增殖和诱导分化，具有更好的抗肿瘤作用，可以减少使用剂量，降低BCG引起的毒副作用；避免了使用外源IFNα－2b所带来的应用剂量大、副作用发生率高、作用时间短暂和费用高昂的问题。

本发明提供了一种皮内注射用重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗，特别提供了重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与卡介苗(BCG)菌液的配比处方、冷冻干燥工艺，同时还提供了涉及该联合疫苗的保护剂、接种剂量、接种途径，属于疫苗生产制备工艺技术领域。该联合疫苗使新生儿接种一针疫苗，可预防乙型肝炎、结核病两种疾病。该联合疫苗含有冻干保护剂，使乙型肝炎病毒表面抗原稳定性提高；并去除单价乙型肝炎疫苗中的铝佐剂、甲醛和硫柳汞等不良成分，安全性提高；兼用卡介苗的强免疫佐剂作用，既增强体液免疫，又增强细胞免疫，使其效果优于单价乙型肝炎疫苗的效果。该联合疫苗采用皮内接种，以低剂量达到相同或超过其它途径高剂量接种的效果。

本发明涉及一种分泌人白介素－2的重组卡介苗rBCGIL－2及其构建方法，利用基因工程技术将起分泌作用的卡介苗Ag85B信号肽片段和人IL－2的基因克隆至pMV261，得到卡介苗穿梭表达载体pMSIL－2，然后采用电转化技术将pMSIL－2导入BCG构建重组卡介苗rBCGIL－2，依靠pMSIL－2在BCG的复制和信号肽的分泌作用，能够高效分泌IL－2。本发明得到的重组卡介苗rBCGIL－2具有BCG和IL－2的双重效果，能够有效预防和治疗浅表性膀胱肿瘤及结核病；利用重组卡介苗rBCGIL－2在膀胱腔内的局部协同作用减少BCG和外用IL－2的用量，可以克服BCG治疗的毒副作用。

本发明涉及一种分泌人干扰素－α 2a的重组卡介苗及其构建方法，利用基因工程技术将起分泌作用的卡介苗Ag85B信号肽片断和人IFN－α 2a的基因克隆至pMV261，得到卡介苗穿梭表达载体pMSIFN－α 2a，然后采用电穿孔技术将pMSIFN－α 2a导入BCG构建重组卡介苗rBCGIFN－α 2a，依靠pMSIFN－α 2a在BCG的复制和信号肽的分泌作用，能够高效分泌IFN－α 2a。本发明得到的重组卡介苗rBCGIFN－α 2a具有BCG和IFN－α 2a的双重效果，能够有效预防和治疗浅表性膀胱肿瘤；利用重组卡介苗rBCGIFN－α 2a在膀胱腔内的局部协同作用减少BCG和外用IFN－α 2a的用量，可以克服BCG治疗的毒副作用。

本发明提供了直接抗艰难梭菌之中和抗毒素。这些抗毒素是利用可溶性重组艰难梭菌毒素蛋白质在禽类物种中产生的。所述禽类抗毒素被设计成可以以治疗量口头施用的药剂,并且可以是任何形式(例如,为固体或者在水溶液中)。这类抗毒素的固体形式可以包含肠溶衣。这些抗毒素在治疗受至少一种细菌毒素侵袭之人类和其它动物上有用。本发明还提供了可以保护被接种的受治疗者使其不出现与艰难梭菌感染有关的发病和致死的疫苗。这些疫苗用于施用到很可能沾染艰难梭菌毒素之人类和其它动物上。

本发明涉及一种分泌人干扰素-α2a的重组卡介苗及其构建方法，利用基因工程技术将起分泌作用的卡介苗Ag85B信号肽片段和人IFN-α2a的基因克隆至pMV261，得到卡介苗穿梭表达载体pMSIFN-α2a，然后采用电穿孔技术将pMSIFN-α2a导入BCG构建重组卡介苗rBCGIFN-α2a，依靠pMSIFN-α2a在BCG的复制和信号肽的分泌作用，能够高效分泌IFN-α2a。本发明得到的重组卡介苗rBCGIFN-α2a具有BCG和IFN-α2a的双重效果，能够有效预防和治疗浅表性膀胱肿瘤；利用重组卡介苗rBCGIFN-α2a在膀胱腔内的局部协同作用减少BCG和外用IFN-α2a的用量，可以克服BCG治疗的毒副作用。

本发明属于遗传工程和结核病疫苗研究技术领域，具体为一种促凋亡重组卡介苗及其制备方法。其通过在大肠杆菌—分枝杆菌穿梭质粒pMV261中依次插入结核保护性抗原Ag85B的信号肽ASP和促细胞凋亡基因BAX先得到重组质粒，再将重组质粒电转入BCG而获得。与BCG相比，本发明所构建的重组卡介苗rBCG::？ASP—BAX具有较强的诱导巨噬细胞发生凋亡的能力，有望提高机体对结核分枝杆菌的免疫力。另一方面，本发明重组卡介苗诱导机体产生的细胞免疫以Th1为主导，更利于形成抗结核分枝杆菌的免疫保护力。因此，本发明的重组卡介苗rBCG::ASP—BAX有望成为新的有效抗结核疫苗,具有较大的研发潜力。