本发明公开了一种肿瘤细胞疫苗的制备方法，旨在提供一种治疗肿瘤或预防肿瘤转移和复发的肿瘤疫苗的制备方法，这种肿瘤疫苗不但能够刺激机体产生抗肿瘤的免疫反应，同时抑制肿瘤的血管生成，从两个方面协同抑制肿瘤的发生发展，因此称为双效肿瘤细胞疫苗。该疫苗由肿瘤抗原和血管内皮细胞两个组分组成。本发明的主要用途是：制备自体或异体肿瘤细胞疫苗；体外诱导制备特异性抗肿瘤CTL，间接刺激免疫反应。

本发明涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白、核酸和细胞。特别是，本发明涉及癌症的免疫疗法。本发明还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(能够例如作为刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗组合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。

本发明涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白、核酸和细胞。特别是，本发明涉及癌症的免疫疗法。本发明还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(能够例如作为刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗组合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。

本发明涉及水疱性口炎病毒(VSV)基质(M)蛋白突变体。一种突变体M蛋白，包括在位置（21）变为谷氨酸的甘氨酸，在位置（111）变为苯丙氨酸的亮氨酸和在位置（51）变为精氨酸的甲硫氨酸。另一种M蛋白突变体，包括在位置（22）变为谷氨酸的甘氨酸和在位置（48）和（51）变为精氨酸的甲硫氨酸。又一种VSV M蛋白突变体，包括在位置（22）变为谷氨酸的甘氨酸，在位置（110）变为苯丙氨酸的亮氨酸和在位置（48）和（51）变为精氨酸的甲硫氨酸。本发明还指向具有这些M突变体的重组VSVs (rVSV)和基于具有本发明的M突变体的rVSV的疫苗。这些具有突变体M的新型rVSVs被显著减毒并丧失了毒性，包括神经毒性，且能够诱导针对目标抗原的免疫应答。此外，具有第一种描述的M突变体的rVSV印第安纳血清型在31℃下能够有效复制，且在约37℃或更高时复制能力差或不能复制。

本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因ORF3-ORF5，插入真菌特异性双T-DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表达载体pCB130NG-ORF3-ORF5，利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪蓝耳病病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，离心收集菌丝，烘干或冻干后，粉碎制备猪蓝耳病重组疫苗。利用本发明生产的猪蓝耳病疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，且可以直接通过口服饲喂动物，具有广泛的社会效益和经济效益。

本发明公开了一种具有免疫保护作用的美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu，在制备美人鱼发光杆菌亚单位疫苗中的应用，其中美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu的制备方法包括pMD18‑T‑EF‑Tu重组载体的构建、质粒pET32a‑EF‑Tu的构建、美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu的诱导表达和美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu的验证。本发明提供了一种具有免疫保护作用的美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu，利用原核表达系统对其表达和纯化，通过动物实验评估该美人鱼发光杆菌胞外蛋白EF‑Tu的免疫保护力，为进一步研制美人鱼发光杆菌亚单位疫苗和核酸疫苗选择奠定基础。

本发明提供用于制备疫苗的铁蛋白纳米颗粒载体，并且还提供基于所述铁蛋白纳米颗粒载体的疫苗，及其制备方法。所述铁蛋白纳米颗粒载体由与SpyCatcher融合表达的铁蛋白自组装而成，或由与SpyTag融合表达的铁蛋白自组装而成，当所述纳米颗粒载体由与SpyCatcher融合表达的铁蛋白自组装而成时，所述疫苗还包含与SpyTag融合表达的抗原，当所述纳米颗粒载体由与SpyTag融合表达的铁蛋白自组装而成时，所述疫苗还包含与SpyCatcher融合表达的抗原，其中铁蛋白与所述抗原之间通过SpyCatcher‑SpyTag相互作用共价连接。

本发明公开了一种M2e合成肽猪流感病毒通用疫苗，该疫苗用分支肽将A型流感病毒M2蛋白N端保守的23个氨基酸序列与通用型辅助性T细胞表位进行连接。本发明还公开了该疫苗在制备预防或治疗猪流感的药物中的应用。本发明的M2e合成肽猪流感病毒通用疫苗，不仅具有长效保护能力，而且具有广泛保护作用，具有产业化优势。