本发明属于动物基因工程疫苗制备技术领域。具体涉及一种支气管败血波氏杆菌aroA(5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶)基因缺失菌株的构建，基因缺失疫苗的制备与应用。所述支气管败血波氏杆菌支气管败血波氏杆基因缺失菌株(Bordetellabronchiseptica)QH0814ΔaroA，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCCNO：M208018，该菌株的缺失了5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(aroA)基因全长1340bp，导致该菌株对芳香族氨基酸的代谢出现障碍。本发明利用该基因缺失菌株制备了支气管败血波氏杆菌基因缺失疫苗。本发明还公开了所述基因缺失菌株在制备支气管败血波氏杆菌基因缺失疫苗(弱毒活疫苗)的应用。

本发明提供了一种重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的构建方法，其包括步骤：以鼠伤寒沙门菌ATCC14028为基础菌株，通过自杀质粒pRE112介导的同源重组法，构建缺失asd、crp和rfbN基因的菌株；通过Gibson组装的方法将纽波特沙门菌ATCC 27869的O‑抗原基因簇部分基因片段wzx‑wbaR‑wbaL‑wbaQ‑wzy‑wbaW‑wbaZ与含T1T2终止子、pSC101 origin、asd基因表达盒、Amp抗性基因盒和Ptrc启动子的DNA骨架片段进行融合连接，构建Asd+质粒pCZ11‑1；将所得Asd+质粒pCZ11‑1转入上述所得菌株，即得。本发明构建得到的重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株具有高水平的针对同源LPS和异源LPS的血清IgG应答，对同源强毒株—鼠伤寒沙门菌ATCC14028和异源强毒株—纽波特沙门菌SLN06具有100％的免疫保护效率。

本发明涉及一种冠状病毒疫苗，包含凋亡细胞释放的微颗粒，所述凋亡细胞释放的微颗粒包括由来源于人的凋亡细胞释放的囊泡状结构物质和包裹于所述囊泡状结构物质中的冠状病毒来源的病毒抗原。本发明的冠状病毒疫苗除了作为预防型疫苗预防冠状病毒感染外，还可以作为治疗型疫苗使用。

本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病毒复合亚单位疫苗制备方法。该制备方法包括：(1)IBDV-VP2N52-417端的366bp的N-VP2蛋白的表达；(2)利用鸡胚传代细胞系DF1细胞制备传染性法氏囊病毒；(3)病毒的灭活；(4)复合亚单位疫苗的制备。与现有技术相比，本发明采用的VP2基因N_52-417端的366bp的基因序列是VP2基因的保守序列，不同毒株间差异不大，对IBDV的保护具有良好的通用性和免疫原性，N-VP2与IBDV灭活全病毒共同制备复合亚单位疫苗降低了IBDV全病毒灭活疫苗制备的成本，N-VP2表达的蛋白具有良好的免疫原性和通用性，与IBDV灭活病毒协同作用，能够提高鸡体内的抗体水平、抗体产生快，提高鸡对IBDV免疫的通用性，能够抵抗不断突变的IBDV的侵袭。

本发明公开了一种基因工程口服DNA疫苗及制备方法和应用，其步骤：A、鲤鱼生长激素成熟肽基因的制备：用鲤鱼脑垂体，提取其总mRNA后，通过RT-PCR得到总cDNA，设计并合成引物；B、融合基因sgh的制备；C、融合基因真核表达载体的构建：用限制性内切酶NheI,　XhoI双酶切pGEM-T-SGH和pcDNA3.1（-），胶回收开环质粒pcDNA3.1（-）和SGH基因的片段，连接后转化到感受态JM109中，得到阳性克隆子为JM109/pcDNA3.1(-)--signal-GH；D、质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌：将质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SalmonellatyphimuriumW0420感受态细胞中，得菌株SalmonellatyphimuriumW0420/pcDNA3.1(-)--signal-GH，为口服DNA疫苗。易于工业化生产，操作简单，成本低，安全性好。该疫苗具有转运促生长的DNA疫苗到克氏螯虾体内的能力，该DNA疫苗能够明显促进克氏螯虾幼虾生长；具有水产养殖业的应用前景。

本发明公开了牛冠状病毒重组多表位抗原，还公开了该牛冠状病毒重组多表位抗原在预防和诊断牛冠状病毒中的应用，属于分子免疫学领域。本发明的牛冠状病毒重组多表位抗原的氨基酸序列是牛冠状病毒BCoV S蛋白抗原表位的串联体。本发明将能引起中和抗体的牛冠状病毒重组多表位抗原作为免疫原或疫苗，免疫动物机体后能够产生针对牛冠状病毒BCoV的中和抗体，并能够在体外中和BCoV，阻止病毒感染动物机体。而且，本发明的牛冠状病毒重组多表位抗原还能够作为检测牛冠状病毒BCoV抗体或者多肽抗体的试剂。

本发明公开了一种人乳头瘤病毒(HPV)16“三肽”联合CpG佐剂疫苗的筛选和验证，以及一种持续表达HPV16E5，E6，E7的肿瘤动物模型的构建方案。采用针对抗原加工相关转运子(TAP)分析多肽片段的方法结合生物信息学，筛选出评分较高的多肽片段，结合体内、外试验得到免疫效果最强的三个片段组成三肽疫苗核心，再结合CPG佐剂，构建出兼具预防、治疗双重作用的HPV16疫苗。同时，构建了一种持续表达HPV16E5，E6，E7的肿瘤动物模型：其技术特征在于：通过腺相关病毒表达系统将HPV16E5稳定的整合到TC-1细胞中，将改造后的TC-1细胞注入C57BL/6小鼠体内，可以成功成瘤。

本发明公开了一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，具体制备步骤包括：细胞复苏；细胞传代；生物反应器培养；接种病毒；病毒收获；Mustang Q XT140膜层析处理；超滤浓缩及灭活；Sepharose 4FF凝胶层析。其中，用Sepharose 4FF凝胶层析为：按柱床体积5～10％进行上样，以0.01M磷酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰；其中，病毒收获为：当抗原含量≥0.3IU/mL时，开始收获，并进行灌流补液，连续收获连续补液；并将收获的所述病毒液用玻璃纤维滤芯进行过滤，去除细胞碎片。本发明制备工艺可有效去除过程中的DNA杂质，使产品得到有效的纯化。